产品货号:
BM0373
中文名称:
RNA扩增试剂盒(冻干制剂,荧光探针法)
英文名称:
Fluorescent RT Isothermal Amplification Kit(Lyophilized)
产品规格:
48T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是通过液氮点液冻干技术制备的即用型逆转录-荧光法恒温扩增试剂盒,含有除引物、模板和探针外的所有组分。用户仅需加入RNA模板、引物、EXO荧光探针、Mg2+和水,即可在37~42℃恒温下快速完成RNA逆转录与cDNA扩增,并可实时检测荧光信号。
组分 | 规格 |
Lyophilized Fluorescent RT Iso-Amp Mix | 48粒 |
Mg(OAc)2 (280mM) | 200μL |
保存:<28℃,严格防潮,不可剧烈振荡。
- 核酸内切酶活性:将1粒Lyophilized Fluorescent RT Iso-Amp Mix溶于25μL ddH2O,再与200ng超螺旋质粒DNA在37℃下共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
- RNase活性:将1粒Lyophilized Fluorescent RT Iso-Amp Mix溶于25μL ddH2O,再与500ng总RNA在37℃下温育1h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,超过90%的RNA仍保持完整。
- 扩增产物的气溶胶易造成假阳性,为避免交叉污染,建议有条件的用户在基因扩增实验室内操作,加样与扩增在不同区域进行。
- 实验时应设置不加模板的空白对照(建议使用开盖无菌水),以确认是否有待扩增核酸的污染。
- 按下表配制反应体系:
试剂 使用量 终浓度 Lyophilized Fluorescent RT Iso-Amp Mix 1粒 RNA模板 5μL 正向引物(10μM) 1μL 0.4μM 反向引物(10μM) 1μL 0.4μM ddH2O 至23.7μL - 引物长度建议为30~35nt,内部无二级结构和连续单碱基重复序列,引物Tm不作考虑。扩增目标片段长度建议为200~500bp。
- 待微球完全溶解后,在反应管盖上加上1.3μL Mg(OAc)2 (280mM)。小心盖紧管盖,上下颠倒5次,瞬时离心收集至管底。
- 迅速将反应管放入预热好的荧光扩增设备中,在37~42℃(建议40℃)下恒温反应20~30min,每隔30 s采集一次荧光信号。
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